用紫外可见分光光度法测定苯甲酸 目的与要求1、掌握吸2113收曲线的测定与5261绘制方法 2、掌握直接比较法定4102量的方法 3、熟悉紫外分光光1653度计的使用方法 原理样品中的苯甲酸在酸性条件下可用水蒸气蒸馏法提取，在碱性条件下形成苯甲酸盐。苯甲酸及其盐对紫外光有选择性吸收，其吸收光谱的最大吸收波长在225nm左右。用紫外可见分光光度计可测定物质在紫外光区、可见光区的吸收光谱，并可定量测定。仪器与试剂1、仪器 751型分光光度计；1cm石英吸收池一套；50ml容量瓶二只；刻度吸管5ml、10ml各一只；滴管一只。2、试剂 苯甲酸标准储备液（1ml相当于0.1mg苯甲酸）；0.1mol/L、0.01mol/L氢氧化钠溶液。操作步骤操作步骤1、苯甲酸吸收曲线的绘制 取苯甲酸储备液4.00ml，置于50ml容量瓶中，用0.01mol/L氢氧化钠溶液定容，摇匀。此液1ml相当于8μg苯甲酸。测定条件：氢灯，1cm石英比色皿，0.01mol/L氢氧化钠为参比测定波长：从210nm-240nm每隔一定波长（2nm-5nm）测定一次吸光度，在225nm左右隔1nm测定一次吸光度。绘制苯甲酸的紫外吸收曲线，得最大吸收波长为测定波长。2、直接比较法测定样品溶液中苯甲酸的含量取10.00ml样品溶液，置于50ml容量瓶中，用0.01mol/L氢氧化钠溶液定容，摇匀后备用。以0。
紫外-可见分光光度法的使用方法 《中华人民共和国药典》2005年版 第一部 附录VA（P附录28）：（1）波长 由于环境因素对机械部分的影响，仪器的波长经常会略有变动，因此除应定期对所用的仪器进行全面校正检定外，还应于测定前校正测定波长。常用汞灯中的较强谱线237.83nm、253.65nm、275.28nm、296.73nm、313.16nm、334.15nm、365.02nm、404.66nm、435.83nm、546.07nm与576.96nm，或用仪器中氘灯的486.02nm与656.10nm谱线进行校正，钬玻璃在279.4nm、287.5nm、333.7nm、360.9nm、418.5nm、460.0nm、484.5nm、536.2nm与637.5nm波长处有尖锐吸收峰，也可作波长校正用，但因来源不同或随着时间的推移会有微小的差别，使用时应注意。（2）吸光度的准确度可用重铬酸钾的硫酸溶液检定。取在120℃干燥至恒重的基准重铬酸钾约60mg，精密称定，用0.005mol/L硫酸溶液溶解并稀释至1000ml，在规定的波长处测定并计算其吸收系数，并与规定的吸收系数比较，应符合表中的规定。波长/nm235（最小）257（最大）313（最小）350（最大）吸收系数的规定值 124.5 144.0 48.62 106.6 吸收系数的许可范围 123.0～126.0 142.8～146.2 47.0～50.3 105.5～108.5（3）杂散光的检查可按下页表的试剂和浓度，配制成水溶液，置1cm。
紫外可见分光光度法谁知道原理 1.基本原理单色光辐射2113穿过被测物5261质溶液时，被该4102物质吸收的量与该物质的浓1653度和液层的厚度（光路长度）成正比，即朗伯-比尔定律，这是吸收光谱法定量的理论依据，其关系式如式 3-1：A=ECL 式(3-1)式中 A 为吸收度；E 为吸收系数，即单位浓度、单位液层厚度的吸收度数值；C 为溶液浓度；L 为液层厚度。紫外-可见分光光度法是根据物质分子对波长为 200~760nm 这一范围的电磁波的吸收特性所建立的光谱分析方法。《中国药典》(2005 年版)有 10 种药材用该法进行药材的有效性评价。其主要特点为：灵敏度高，可达 10-4 g/ml~10-7 g/ml；准确度高，相对误差为 2％~5％。中药中有紫外吸收的成分或本身有颜色的成分，在一定的浓度范围内，其溶液的吸收度与浓度符合朗伯-比尔定律，均可用此法进行分析。本法适于大类成分的含量测定，如总黄酮、总蒽醌、总生物碱等。2.定量测定法测定时，应以配制供试品溶液的同批溶剂为空白对照，采用 1cm 的石英吸收池，在选（规）定的吸收峰波长±2nm 以内测试几个点的吸光度，或由仪器在选定波长附近自动扫描测定，以吸光度最大的波长作为测定波长。一般供试品溶液的吸光度读数，以在 0.3～0.7 之间的误差较小。当溶液的 。
