PCR引物必须与目的基因片段的一小段序列互补吗 PCR引物必须与目的基因片段的一小段序列互补1，PCR引物是利用碱基互补原则，通过找到一对合适的核苷酸片段，使其能有效地扩增模板DNA序列。2，首先要找到你用来设计引物的目的基因全序列，一般NCBI、Genebank上都能找得到。3，引物的长copy度一般为15-30 bp，常用的是18-27 bp，但不应大于38，因为过长会导 致其延伸温度大于74℃，不适于Taq DNA聚合酶进行反应；引物zd3’端尽量不要出现3个以上的连续碱基，如GGG或CCC，这样会会增加错配几率，3’端尽量不要以A为结尾；引物序列的GC含量一般为40-60%，过高或过低都不利于引发反应。上下游引物的 GC含量不能相差太大；ΔG值是指DNA双链形成所需的自由能，该值反映了双链结构内部碱基对的相对稳 定性。应当选用3’端ΔG值较低（绝对值不超过9），而5’端和中间ΔG值相对较高的引物。引物的3’端的ΔG值过高，容易在错配位点形成双链结构并引发DNA聚合反应；对引物的修饰一般是在5’端增加酶切位点，应根据下一步实验中要插入PCR产物 的载体的相应序列而确定。
PCR扩增时RNA引物序列设计时，引物序列是与目标基因前的序列互补呢，还是与目标基因互补？ 与目标基因前的序列互补，你的引物的目的是扩增出目的基因，当然是要用基因前的序列作为模板了，自己再仔细想想
PCR扩增目标基因，完全没有条带。是不是设计的引物太短？引物只有10个碱基和模板配对 引物短了点，一般18-25bp，上30bp都可以。primer 5软件设计的时候，软件是设计的10bp的？不是吧？另外，是不是看看解链温度，PCR仪导热不太好，DNA双链有可能没解开，这个是许许多多PCR失败的关键原因。
PCR扩增目标基因，完全没有条带.是不是设计的引物太短？引物只有10个碱基和模板配对
PCR扩增目标基因，完全没有条带。是不是设计的引物太短？引物只有10个碱基和模板配对
PCR引物是目的基因中的一段么，还是和目的基因中的某段是互补的？ 前提表述有误，因为DNA复制需要RNA引物，所以PCR才需要人工引入引物.但是该引物绝对不会在目的基因中，它是一段与DNA互补的RNA链，而且与目的基因之外的两端互补.要是与目的基因中的序列互补，PCR出来的基因就会是不完整的
pcr 一段2000多bp的基因 引物设计 PCR引物设计的法则什么的网上很多，相信你估计也已经看过了。放轻松一点，我当时用的PP5，并不是说他设计的引物分数低了你就P不出来了，这些都不是绝对的。初次设计引物，总归不那么平静。其实，你可以请师兄师姐教教你，不耽误自己的实验进度。自己也可以尝试设计一两对引物，PCR尝试一下。因为PCR毕竟不是那么难，当然，你的题目我没看明白，如果真的要PCR的产物有2000多bp的话，也有点麻烦。像我以前做原核表达的时候，基本引物两端都固定了，也照样能P出来。最近我一个同学做PCR，产物也有2000bp，他刚解决了这个问题，因为Mg离子浓度的问题，优化PCR条件也很重要。其实一般来说，都按照一个通用的体系，就这么做了，TaKaRa的缓冲液都是现成的，生工的还把Mg离子分开。其实说了半天，没回答你怎么设计引物。我只想说，take it easy。太多条条框框没有用，我同学他们设计引物只用眼睛看就OK了，难道非要系统评分100么，当然考虑到实验成本，尽量吧，good luck。
