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FRET引物是什么 LC3b定位于胞质还是胞核

2020-10-04知识17

FRET引物是什么 Taqman探针法的出现是定量PCR技术的重要里程碑,之后在此基础上发展出了杂交探针法,以及荧光引物法,是对探针法的不断改进和简化.如果希望全面掌握定量PCR技术的研究人员就不能错过这些定量检测技术.要提到荧光探针或者荧光引物,有一个基础概念需要首先明确,那就是荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET):一对合适的荧光物质可以构成一个能量供体(donor)和能量受体(acceptor)对,其中供体的发射光谱与受体的吸收光谱重叠,当它们在空间上相互接近到一定距离(1—10 nm)时,激发供体而产生的荧光能量正好被附近的受体吸收,使得供体发射的荧光强度衰减,受体荧光分子的荧光强度增强.能量传递的效率和供体的发射光谱与受体的吸收光谱的重叠程度、供体与受体的跃迁偶极的相对取向、供体与受体之间的距离等有关.定量PCR所涉及的荧光探针和荧光引物的检测都这个FRET原理相关.FRET技术原理:罗氏专利的FRET探针又称为双杂交探针,或者LightCycle探针.FRET探针由两条和模版互补、且相邻的特异探针组成(距离1—5bp),上游探针的3`端标记供体荧光基团,相邻下游探针的5`端标记Red 640受体荧光基团.当复性时,两探针同时结合在模板上,供体基团和Red640受体基团紧密。

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#荧光检测#taqman探针#荧光强度#荧光共振能量转移

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