原生质体的固体培养法有哪些步骤？ 固体培养的步骤为：原生质体移入培养基→1体积含原生质体的培养基与1体积含琼脂（40摄氏度）的培养基混合→倒转培养皿在25摄氏度下培养→原生质体重新产生细胞壁并分裂成细胞团→细胞团于琼脂糖基质中传代培养，培养基中减少渗压剂以利于愈伤组织的形成→诱导分化成植物的根、茎。
下面是烟草叶片原生质体分离和培养的流程图： （1）在获得植物原生质体时，需在0.5～0.6mol/L的甘露醇溶液环境（较高渗透压）下用纤维素酶和果胶酶混合液处理实验材料，将细胞壁消化除去，获得球形的原生质体．（2）获得原生质体后可用红墨水染色法检测，因为生活状态的原生质体细胞膜具有选择透过性，原生质体不会被染上颜色，但如果原生质体死亡，由膜的选择透过性丧失，原生质体会被染成红色；对原生质体进行显微计数，必须将原生质体制成的悬浮液滴加在血细胞计数板上；可用质壁分离实验来检测原生质体是否已经形成细胞壁．（3）要将原生质体培养成愈伤组织，配置培养基时需要注意营养物质的适当配比和植物生长调节剂的适当配比．故答案为：（1）甘露醇（2）红墨水染色 血细胞计数板 质壁分离（3）营养物质的适当配比和植物生长调节剂的适当配比
原生质体要怎样培养？ 将有生活力的原生质体在适当的培养基和培养条件下培养，很快就开始细胞壁再生和细胞分裂的过程。约12个月后，通过细胞的持续分裂，在培养基上出现肉眼可见的细胞团。细胞团长到24mm左右，即可转移到分化培养基上，诱导芽和根长成完整的植株。
