血清总蛋白测定 双缩脲比色法的原理 有谁知道？ 大鼠血清总蛋白含量测定（双缩脲比色法）一．原理蛋白质是由许多氨基酸通过肽键相互结合而成。肽键在碱性溶液中能与铜离子作用产生紫红色络合物。测定紫红色络合物的吸光度，能计算总蛋白的含量。二．e799bee5baa6e79fa5e98193e78988e69d8331333330336332目的1．掌握血清总蛋白含量的测定方法。2．观察阴虚大鼠模型血清总蛋白含量的变化。3．观察中药对阴虚大鼠模型血清总蛋白含量的变化。三．试剂1．总蛋白试剂硫酸铜0.12 mmol/L酒石酸钾钠21.1 mmol/L氢氧化钠0.75 mmol/L2．蛋白标准液：血清白蛋白50g/L四．材料1．试管（100*16mm）3支2．移液器（P20ul、P200ul、P1000ul）各1把3．石英比色皿（1ml）4只五．测定方法单位：ul空白管（b）标准管（std）测定管（s）H2O蛋白标准液（50.0g/L）样品总蛋白试剂10.5105010.5105010.51050混匀，室温放置30分钟，以空白管校零，测定550nm处的吸光度。六．计算总蛋白含量（g/L）＝（测定管吸光度/标准管吸光度）×标准液浓度七．注意事项1．室温放置30分钟后必须立即测定吸光度，否则吸光度会增加。2．实验试剂用量较少，所以加量一定要仔细、准确。
生化实验双缩脲法测定血清总蛋白质中的公式怎么推出来的 双缩脲反应的原理双缩脲(NH2-CO-NH-CO-NH2)在碱性溶液中可与铜离子产生紫红色的络合物，这一反应称为双缩脲反应双缩脲反应主要涉及肽键、尿素中含有类似肽键的结构、可与铜离子产生紫红色的络合物双缩脲试剂是由双缩脲试剂A和双缩脲试剂B两种试剂组成双缩脲试剂A的成分是氢氧化钠的质量分数为0.1 g/mL的水溶液；双缩脲试剂B的成分是硫酸铜的质量分数为0.01 g/mL的水溶液.双缩脲试剂可以验证蛋白质的存在.而尿素中不含蛋白质，所以尿素不能与双缩脲试剂反应
双缩脲法测定蛋白质的含量实验分析与讨论怎么写？ 双缩脲法测定蛋白质含量的干扰因素有哪些：双缩脲法测定蛋白质含量的干扰因素有三羟甲基氨基甲烷、一些氨基酸和EDTA。双缩脲法是一个用于鉴定蛋白质的分析方法。双缩脲试剂是一个碱性的含铜试液，呈蓝色，由1%氢氧化钾、几滴1%硫酸铜和酒石酸钾钠配制。当底物中含有肽键时，试液中的铜与多肽配位，配合物呈紫色。可通过比色法分析浓度，在紫外可见光谱中的波长为540nm。鉴定反应的灵敏度为5~160mg/ml。双缩脲法测定蛋白质含量需注意哪些问题在使用双缩脲试剂时候，必须注意，必须是先加0.1 g/mL氢氧化钠溶液，再加0.01 g/mL硫酸铜的水溶液。(若先加入硫酸铜[CuSO4]溶液，再加入氢氧化钠[NaOH]溶液，则无法充分制造碱性环境，此时CuSO4会与NaOH发生复分解反应，生成蓝色氢氧化铜[Cu(OH)2]沉淀，导致现象不清，无法较好地达到实验目的。另外，能与双缩脲试剂发生紫色反应的化合物分子中至少含有两个肽键。因此，二肽无法用它来检验。
双缩脲法测定蛋白质含量需注意哪些问题 双缩2113脲试剂由NaOH溶液（52610.1g/mL）和CuSO？溶液（0.01g/mL）配制而成，配制比例为5：1。但是双缩脲试剂4102不用现配现用，先加入1653NaoH营造碱性环境，再加入CuSO？。双缩脲反应主要涉及肽键，因此受蛋白质特异性影响较小。且使用试剂价廉易得，操作简便，可测定的范围为1～10mg蛋白质，适于精度要求不太高的蛋白质含量的测定，能测出的蛋白质含量须在约0.5mg以上。双缩脲法的缺点是精确度低、所需样品量大。干扰此测定的物质包括在性质上是氨基酸或肽的缓冲液，如TrIs缓冲液，因为它们产生阳性呈色反应，铜离子也容易被还原，有时出现红色沉淀。扩展资料双缩脲法1、实验原理双缩脲（NH？CONHCONH？）是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中，双缩脲与二价铜离子形成紫色络合物，称为双缩脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能够以一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、Tris缓冲液和某些氨基酸等。此法的优点是较快速，不同的蛋白质产生颜色的。
