ZKX's LAB

请问提取细胞核蛋白和浆蛋白提取方法上有什么不同吗?是否还可以用actin等常用内参? 组织胞浆内参蛋白

2020-10-03知识12

western 内参用的GAPDH 和B-actin蛋白的分子量是多少 western 内参用的GAPDH分子2113量为146KD,检测5261条带大约在36kD,B-actin分子量为42KD。严谨的Western Blot实验设4102计中要求有良好的参照体1653系,这对实验结果分析是非常有用。要用Western Blot比较不同条件下或者不同组织中,目的蛋白表达量的相对多少,前提条件是等量的细胞上样,才有比较的基础。特别表达量不高时,上样量的差别就很可能影响结果的分析。因此需要内参很重要。

请问提取细胞核蛋白和浆蛋白提取方法上有什么不同吗?是否还可以用actin等常用内参? 组织胞浆内参蛋白

核蛋白,胞浆蛋白,膜蛋白做WB 用什么做内参抗体

请问提取细胞核蛋白和浆蛋白提取方法上有什么不同吗?是否还可以用actin等常用内参? 组织胞浆内参蛋白

什么是胞浆蛋白,做WB时用什么做内参? =胞浆蛋白就是胞浆里的蛋白啊…用普通的提取方法就好了,网上一搜一大堆…做胞浆蛋白的话,WB的内参一般为β-actin或者GAPDH,主要还是要看你的细胞表达哪一个。

请问提取细胞核蛋白和浆蛋白提取方法上有什么不同吗?是否还可以用actin等常用内参? 组织胞浆内参蛋白

western blot 内参 actin 是43还是45 kda

检测细胞浆蛋白能用actin当内参么 可以,actin/tublin/GAPDH,都行,因为,目标的胞浆蛋白,但是,现在的技术是无法获取完全的胞浆蛋白,还是要用总蛋白,既然要用总蛋白,那么,以上提到的内参都行、

在电泳时为什么目的条带出来了,但内参却做不出来呢? 首先看内参是不是选择合适,比如胞浆或者总蛋白白应该选择(beta-Actin或者Tubulin),核蛋白应该是选择Lamin等等,其次是确定你的内参抗体有没有问题,稀释度是否恰当,二抗种属是否用对了,诸如此类吧

在WB中心肌细胞蛋白应该用什么做内参 要检测一个基因的表达产物是否正确,或者比较表达产物量的相对变化,首选方法是Western Blot。因为Western Blot操作相对简单方便,既可以定性分析表达产物,同时还可以指示目的蛋白量的相对变化。虽然,顺利的时候Western Blot做起来很简单,可不顺的时候也很令人心烦――做不出结果啦、假阳性啦、结果出现多条带啦、到底是一抗有问题还是二抗有问题啦…毕竟,作为一种有活性的生物大分子,抗体和抗原的反应毕竟不象1+1那么明确,而用这种不确定的试剂来测定同样知之甚少的表达产物,确实是有一定的不确定性的。所以,严谨的Western Blot实验设计中要求有良好的参照体系,对实验结果分析是非常有用。特别是当实验出现问题时,借助参照体系很容易就可以查出问题所在,而不必抓耳挠腮怨天尤人。良好的参照体系通常包括分子量Marker(用来确定蛋白条带对应的分子量大小)、空白载体对照(如果是诱导表达体系还应该有诱导前的对照)、已知量标准产物的正对照,另外还有内参。可是由于经费限制或者偷懒的原因,国内的不少人做Western Blot往往省略参照,导致结果出现问题时无法分析结果,即便有结果也可能影响结果的分析。内参即是内部参照(Internal Control),对于哺乳动物细胞。

什么是胞浆蛋白,做WB时用什么做内参? 胞浆蛋白就是胞浆里的蛋白啊…用普通的提取方法就好了,网上一搜一大堆…做胞浆蛋白的话,WB的内参一般为β-actin或者GAPDH,主要还是要看你的细胞表达哪一个。

#western#科普

qrcode
访问手机版