液相色谱柱上组分A.B的平均理论塔板数计算公式 ⊕理论塔板数2113(theoretical plate number,N)用于定量表5261示色谱柱的分离效率(简称柱效4102)。N取决于固定相1653的种类、性质(粒度、粒径分布等)、填充状况、柱长、流动相的种类和流速及测定柱效所用物质的性质。如果峰形对称并符合正态分布,N可近似表示为:N=(tR/σ)2=16(tR)2/W=5.54(tR/W1/2)2W:峰宽;σ:曲线拐点处峰宽的一半,即峰高0.607处峰宽的一半。N为常量时,W随tR成正比例变化。在一张多组分色谱图上,如果各组份含量相当,则后洗脱的峰比前面的峰要逐渐加宽,峰高则逐渐降低。用半峰宽计算理论塔板数比用峰宽计算更为方便和常用,因为半峰宽更容易准确测定,尤其是对稍有拖尾的峰。N与柱长成正比,柱越长,N越大。用N表示柱效时应注明柱长,如果未注明,则表示柱长为1米时的理论塔板数。(一般HPLC柱的N在1000以上。若用调整保留时间(tR’)计算理论塔板数,所得值称为有效理论塔板数(N有效或Neff)=16(tR’/W)2⊕理论塔板高度(theortical plate height,H)每单位柱长的方差。H=。实际应用时往往用柱长L和理论塔板数计算:H=L/N在实际应用中能达到分离完全就可以了,塔板数超过会增加试验的时间,试验效率就会降低。
高效液相色谱柱怎样反冲呢?
高效液相色谱柱色谱条件筛选过程中应遵循哪些原则 色谱定量分析是根据组分检测响应讯号的大小,定量确定试样中各个组分的相对含量。其依据是:每个组分的量(重量或体积)与色谱检测器产生的检测响应值(峰高或峰面积)成正比。具体到特定方法,主要有下列方法:1.归一化法当样品中所有组分能全部流出色谱柱,并在检测器上都能产生相应信号(得到色谱峰)时,常采用归一化法。Ci=mi/m×100%fi?Ai/Σ fi?Ai×100%优点:简单方便,不受进样量及操作条件波动的影响缺点:所有组分都必须出峰,每个组分都必须有校正因子2.外标法(又称标准曲线法)配制已知浓度的标准样品进行色谱分析,测量各组分的峰面积或峰高,作峰面积(或峰高)和浓度的标准曲线,然后在与标准样品分析相同操作条件下,进入相同量(一般为体积)的未知样品,测得被分析组分的峰面积(或峰高),在标准曲线上即可查得相应的浓度。在工厂的日常控制分析中大多数采用这种方法,分析结果的准确性主要取决于进样量的重复性和操作条件的稳定性。Ci=mi/m×100%fiAi/m×100%校正:标准曲线、两点法、单点法优点:简便、无需所有组分都出峰(校正因子),经常用于几个组分的分析缺点:操作条件波动的影响较大,进样量影响大3.内标法由于吸附或化学。