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什么是胞浆蛋白,做WB时用什么做内参? 胞浆蛋白 内参

2020-10-01知识15

什么是胞浆蛋白,做WB时用什么做内参? =胞浆蛋白就是胞浆里的蛋白啊…用普通的提取方法就好了,网上一搜一大堆…做胞浆蛋白的话,WB的内参一般为β-actin或者GAPDH,主要还是要看你的细胞表达哪一个。

核蛋白,胞浆蛋白,膜蛋白做WB 用什么做内参抗体 actinGAPDH万能内参主要看你的目标蛋白的分子量多大,“目标蛋白要与内参蛋白的分子量差异大!方便检测核蛋白,有很多种,分子量不同膜蛋白,有很多很多种,分子量不同浆蛋白,有成千上万种,分子量不同。具体实验,具体目的蛋白,具体的内参。

什么是胞浆蛋白,做WB时用什么做内参? 胞浆蛋白就是胞浆里的蛋白啊…用普通的提取方法就好了,网上一搜一大堆…做胞浆蛋白的话,WB的内参一般为β-actin或者GAPDH,主要还是要看你的细胞表达哪一个。

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检测细胞浆蛋白能用actin当内参么 可以,actin/tublin/GAPDH,都行,因为,目标的胞浆蛋白,但是,现在的技术是无法获取完全的胞浆蛋白,还是要用总蛋白,既然要用总蛋白,那么,以上提到的内参都行、

western 内参用的GAPDH 和B-actin蛋白的分子量是多少? western 内参用的GAPDH分子量为146KD,检测条带大约在36kD,B-actin分子量为42KD。严谨的Western Blot实验设计中要求有良好的参照体系,这对实验结果分析是非常有用。要用。

WesternBlot为什么必须要用内参? 在 Western Blot 中使用内参其实就是在 WB 过程中另外用内参对应的抗体检测内参,这样在检测目的产物的同时可以检测内参的表达,由于内参在各组织和细胞中的表达相对恒定,借助检测每个样品内参的量就可以用于校正蛋白质定量、上样过程中存在的实验误差,保证实验结果的准确性。此外使用内参可以作为空白对照,检测蛋白转膜情况是否完全、整个 Western Blot 显色或者发光体系是否正常。常用的蛋白质内参有 GAPDH 和细胞骨架蛋白 beta-actin 或 beta-tubulin。一般要选择一个在处理因素作用的条件下蛋白含量不会发生改变的蛋白作内参。厚百 Western Blot试剂以下是常见的内参:内参名称 分子量大小 适用范围Beta-actin 43 kDa 胞浆和全细胞GAPDH 30-40 kDa 胞浆和全细胞Tubulin 55 kDa 胞浆和全细胞VCDA1/Porin 31 kDa 线粒体COXIV 16 kDa 线粒体Lamin B1 66 kDa 细胞核TBP 38 kDa 细胞核

western blot 内参 actin 是43还是45 kda 一、为什么要使用内参呢?Western blot除了能证明某样品含有某种蛋白之外,其最为重要的作用是比较不同条件下或者不同组织中,目的蛋白表达量的相对多少。即为蛋白表达水平最直接的证据。要衡量蛋白的表达水平,前提条件就是等量的上样量。然而如果仅将蛋白浓度测定作为规范需相互比较的各种样品间上样量等同的唯一方法,显然是不可取的。首先各种蛋白质浓度定量方法都存在局限性,不能完全准确的确定各种样品的蛋白浓度。如UV法直接定量,适合测试较纯净、成分相对单一的蛋白质,相对于比色法来说,操作简单,但是容易受到平行物质如DNA的干扰,且敏感度低,要求蛋白的浓度较高。比色法测定蛋白浓度一般有BCA、Bradford、Lowry等几种方法。BCA法与Lowry法都容易受到蛋白质之间以及去污剂的干扰。Bradford法敏感度最高,且与一些列干扰Lowry、BCA反应的还原剂(如DTT、巯基乙醇)相溶,但是对去污剂依然是敏感的,其最主要的缺点是不同的标准品会导致同一样品的结果差异较大,无可比性。另外,蛋白质定量以后进行电泳时需要等量上样,此步骤也存在操作误差。在Western Blot实验时使用内参,即可简便地对定量和上样步骤产生的误差进行校正。在Western Blot中使用内参。

请问提取细胞核蛋白和浆蛋白提取方法上有什么不同吗?是否还可以用actin等常用内参?

#电泳#科普#western#蛋白电泳

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