什么是限制性内切酶？ii型限制性内切酶的结构特点及性质 限制性内切酶一般指限制性核酸内切酶，限制性核酸内切酶是可以识别特定的核苷酸序列，并在每条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键进行切割的一类酶，简称限制酶。根据限制酶的结构，辅因子的需求切位与作用方式，可将限制酶分为三种类型，分别是第一型（Type I）、第二型（Type II）及第三型（Type III）。Ⅰ型限制性内切酶既能催化宿主DNA的甲基化，又催化非甲基化的DNA的水解；而Ⅱ型限制性内切酶只催化非甲基化的DNA的水解。III型限制性内切酶同时具有修饰及认知切割的作用。第二型限制酶只具有识别切割的作用，修饰作用由其他酶进行。所识别的位置多为短的回文序列（palindrome sequence）；所剪切的碱基序列通常即为所识别的序列。是遗传工程上，实用性较高的限制酶种类。例如：EcoRI、HindⅢ。
限制性内切酶种类及应用 急求！！！ 1986 年下2113半年发现 615 种限制酶和 98 种甲基化5261酶；1998 年发现 10000 种细菌4102或古细菌中存在 3000 种酶，且酶有1653 200 多种特异性。到 2005 年 1 月，共发现 4342 种限制酶和甲基化酶，其中限制酶有 3681 种，包括 Ⅰ 型、Ⅱ 型、Ⅲ 型限制酶各有 59、3612、10 种，甲基化指导的限制酶有 3 种，商业化的限制酶有 588 种，在 Ⅱ 型限制酶中共有 221 种特异性。限制与修饰系统的种类根据酶的亚单位组成、识别序列的种类和是否需要辅助因子，限制与修饰系统至少可分为四类。表 2-2 是各种限制与修饰系统的比较。Ⅱ 型（type Ⅱ）限制与修饰系统所占的比例最大，达 93%。Ⅱ 型酶相对来说最简单，它们识别回文对称序列，在回文序列内部或附近切割 DNA，产生带 3'-羟基和 5'-磷酸基团的 DNA 产物，需 Mg2+的存在才能发挥活性，相应的修饰酶只需 SAM。识别序列主要为 4-6bp，或更长且呈二重对称的特殊序列，但有少数酶识别更长的序列或简并序列，切割位置因酶而异，有些是隔开的。Ⅱs 型（type Ⅱs）限制与修饰系统，占 5%，与 Ⅱ 型具有相似的辅因子要求，但识别位点是非对称，也是非间断的，长度为 4-7bp，切割位点可能在识别位点一侧的 20bp 范围内。Ⅱ 。
II型限制酶它作用时需要什么离子作辅助因子 II 型酶就是通常基因工程中使用的DNA 限制性内切酶。II 型酶限制修饰系统分别由限制酶和修饰酶组成。II 型限制酶需要Mg2+
限制修饰系统的介绍 大多数限制性内切酶常2113常伴随有1~52612种修饰酶（DNA甲基化酶），后4102者能保护细胞自身的DNA不被限1653制性内切酶破坏。修饰酶识别的位点与相应的限制性内切酶相反，它们的作用是甲基化每条链中的一个碱基，而不是切开DNA链。甲基化所形成的甲基基团能伸入到限制性内切酶识别位点的双螺旋大沟中，阻碍限制性内切酶发挥作用。这样，限制性内切酶和它的“搭档”修饰酶一起组成R-M系统。在某些R-M系统中，限制性内切酶和修饰酶是两种不同的蛋白，它们各自独立行使自己的功能；另一些R-M系统本身就是一种大的限制-修饰复合酶，由不同亚基或同一种亚基的不同结构域来分别执行限制或修饰的功能。
基因工程这一节中，限制性内切酶是只存在于原核细胞吗？基因工程中这个酶是在体外发挥作用吗？ 30多年前，当人们在对噬菌体的宿主特异性的限制-修饰现象进行研究时，首次发现了限制性内切酶。细菌可以抵御新病毒的入侵，而这种\"限制\"病毒生存的办法则可归功于细胞内部可摧毁外源DNA的限制性内切酶。首批被发现的限制性内切酶包括来源于大肠杆菌的EcoR I和EcoR II，以及来源于Heamophilus influenzae的Hind II和Hind III。这些酶可在特定位点切开DNA，产生可体外连接的基因片段。研究者很快发现内切酶是研究限制性内切酶的主要功能是保护细菌不受噬菌体的感染，这一观点已被人们广泛接受。它们作为微生物免疫 机制的一部分行使其功能。当一个没有限制性内切酶的细菌被病毒感染时，大部分病毒颗粒都能成功地进行感染。然而一个有限制性内切酶的同种细菌被成功感染的比率显著下降。出现更多的限制性内切酶将会起到多重保护作用；而一个拥有4到5种各自独立的限制性内切酶将会使细胞坚不可摧。限制性内切酶常常伴随一到两种修饰酶(甲基化酶)出现。后者的作用是保护细胞自身的DNA不被限制性内切酶破坏。修饰酶识别的位点与相应的限制性内切酶相同，但只甲基化每条链中的一个碱基，而不是切开DNA链。限制性内切酶识别位点处的甲基基团伸入到双螺旋 的大沟中去，阻碍了。
细菌的限制一修饰系统有什么意义 细菌的甲基化修饰出现在染色体复制时期。在生物个体的生长发育与繁殖过程中维持遗传物质的稳e5a48de588b6e799bee5baa631333363373662定性是至关重要的。细胞采用多种机制来保证DNA复制的忠实性，如DNA的双螺旋结构与半保留复制模式为遗传物质的稳定提供了物质基础；DNA聚合酶Ⅲ除了具有DNA聚合酶活性外还具有核酸外切酶活性，可及时去除错配掺入的碱基；DNA复制后存在多种修复机制进一步保证了遗传物质的稳定性。DNA甲基化在DNA复制起始、错配修复、细菌中寄主控制的修饰与限制以及转座子的失活等过程中对维持遗传信息的稳定性发挥着重要的作用。DNA甲基化修饰经常通过限制修饰系统与细菌的自我防卫机制紧密相关。所谓“限制修饰系统”是原核生物在进化过程中形成的遗传信息保护机制。“限制”如同特殊的刀，而“修饰”好比定制的盾。当细菌被入侵后外来的DNA会被“限制”消灭，自身的DNA由于被“修饰”而得到保护。经典的甲基化限制修饰系统中，一旦“修饰”被破坏，“限制”会无节制地破坏细菌DNA，最终导致细菌的死亡。细菌细胞内有限制性内切酶，但是细菌的基因组上也有限制性内切酶的切割位点，为了不让基因组被限制性内切酶降解，细胞便将自己的这些序列甲基化。
质粒DNA的限制性内切酶酶切分析哪里会有介绍？生物方面知识在哪里可以了解
质粒的必修条件？ 当然是同一质粒上几个有不同种类的限制酶切割点目的是与外缘基因连接，因为这两者不是需要同一种限制性内切酶吗？可如果获得外缘基因那种内切酶，在质粒中没有酶切割点不就没用了吗。所以质粒需要几个有不同种类的限制酶切割点
