双缩脲法测定蛋白质的含量实验分析与讨论怎么写? 双缩脲法测定蛋白质含量的干扰因素有哪些:双缩脲法测定蛋白质含量的干扰因素有三羟甲基氨基甲烷、一些氨基酸和EDTA。双缩脲法是一个用于鉴定蛋白质的分析方法。双缩脲试剂是一个碱性的含铜试液,呈蓝色,由1%氢氧化钾、几滴1%硫酸铜和酒石酸钾钠配制。当底物中含有肽键时,试液中的铜与多肽配位,配合物呈紫色。可通过比色法分析浓度,在紫外可见光谱中的波长为540nm。鉴定反应的灵敏度为5~160mg/ml。双缩脲法测定蛋白质含量需注意哪些问题在使用双缩脲试剂时候,必须注意,必须是先加0.1 g/mL氢氧化钠溶液,再加0.01 g/mL硫酸铜的水溶液。(若先加入硫酸铜[CuSO4]溶液,再加入氢氧化钠[NaOH]溶液,则无法充分制造碱性环境,此时CuSO4会与NaOH发生复分解反应,生成蓝色氢氧化铜[Cu(OH)2]沉淀,导致现象不清,无法较好地达到实验目的。另外,能与双缩脲试剂发生紫色反应的化合物分子中至少含有两个肽键。因此,二肽无法用它来检验。
双缩脲法测血清蛋白质含量实验的干扰因素 干扰因素是尿素,双缩脲识别蛋白质的方法是检测肽键,而血清中含有尿素,尿素的结构和肽键很相似,尿素遇双缩脲也会产生紫色反应.因此干扰因素是尿素.
血清总蛋白测定 双缩脲比色法的原理 有谁知道? 大鼠血清总蛋白含量测定(双缩脲比色法)一.原理蛋白质是由许多氨基酸通过肽键相互结合而成。肽键在碱性溶液中能与铜离子作用产生紫红色络合物。测定紫红色络合物的吸光度,能计算总蛋白的含量。二.e799bee5baa6e79fa5e98193e78988e69d8331333330336332目的1.掌握血清总蛋白含量的测定方法。2.观察阴虚大鼠模型血清总蛋白含量的变化。3.观察中药对阴虚大鼠模型血清总蛋白含量的变化。三.试剂1.总蛋白试剂硫酸铜0.12 mmol/L酒石酸钾钠21.1 mmol/L氢氧化钠0.75 mmol/L2.蛋白标准液:血清白蛋白50g/L四.材料1.试管(100*16mm)3支2.移液器(P20ul、P200ul、P1000ul)各1把3.石英比色皿(1ml)4只五.测定方法单位:ul空白管(b)标准管(std)测定管(s)H2O蛋白标准液(50.0g/L)样品总蛋白试剂10.5105010.5105010.51050混匀,室温放置30分钟,以空白管校零,测定550nm处的吸光度。六.计算总蛋白含量(g/L)=(测定管吸光度/标准管吸光度)×标准液浓度七.注意事项1.室温放置30分钟后必须立即测定吸光度,否则吸光度会增加。2.实验试剂用量较少,所以加量一定要仔细、准确。
双缩脲法测定蛋白质含量的临床意义 (1)正常参考范围:60-80g/L.(2)血浆蛋白质浓度增高:临床上主要见于因各种原因引起的血浆浓缩.(3)血浆蛋白质浓度降低:临床上主要见于严重肝病、肾病、营养不良、血液稀释等.
双缩脲法测定蛋白质含量的干扰因素有哪些 1、碱性环境:在使用双缩脲试剂时候,必须注意,必须是先加0.1 g/mL氢氧化钠溶液,再加0.01 g/mL硫酸铜的水溶液。若先加入硫酸铜溶液,再加入氢氧化钠溶液,则无法充分制造碱性环境,此时硫酸铜会与氢氧化钠发生复分解反应,生成蓝色氢氧化铜沉淀,导致现象不清,无法较好地达到实验目的。2、蛋白质浓度:双缩脲法常用于0.5g/L~10g/L含量的蛋白质溶液测定。扩展资料双缩脲法的实验原理:双缩脲是两个分子脲经180℃左右加热,放出一个分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中,双缩脲与二价铜离子形成紫色络合物,称为双缩脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键,或能够以一个中间碳原子相连的肽键,这类化合物都有双缩脲反应。紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比,而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关,故可用来测定蛋白质含量。干扰这一测定的物质主要有:硫酸铵、Tris缓冲液和某些氨基酸等。此法的优点是较快速,不同的蛋白质产生颜色的深浅相近,以及干扰物质少。主要的缺点是灵敏度差,不适合微量蛋白的测定。参考资料来源:-双缩脲法参考资料来源:-双缩脲试剂参考资料来源:-蛋白质测定