激光扫描共聚焦荧光显微镜的共聚焦扫描显微镜的成像原理 采用点光源照射标本，在焦平面上形成一个轮廓分明的小的光点，该点被照射后发出的荧光被物镜收集，并沿原照射光路回送到由双向色镜构成的分光器。分光器将荧光直接送到探测器。光源和探测器前方都各有一个针孔，分别称为照明针孔和探测针孔。两者的几何尺寸一致，约100-200nm；相对于焦平面上的光点，两者是共轭的，即光点通过一系列的透镜，最终可同时聚焦于照明针孔和探测针孔。这样，来自焦平面的光，可以会聚在探测孔范围之内，而来自焦平面上方或下方的散射光都被挡在探测孔之外而不能成像。以激光逐点扫描样品，探测针孔后的光电倍增管也逐点获得对应光点的共聚焦图像，转为数字信号传输至计算机，最终在屏幕上聚合成清晰的整个焦平面的共聚焦图像。每一幅焦平面图像实际上是标本的光学横切面，这个光学横切面总是有一定厚度的，又称为光学薄片。由于焦点处的光强远大于非焦点处的光强，而且非焦平面光被针孔滤去，因此共聚焦系统的景深近似为零，沿Z轴方向的扫描可以实现光学断层扫描，形成待观察样品聚焦光斑处二维的光学切片。把X-Y平面（焦平面）扫描与Z轴（光轴）扫描相结合，通过累加连续层次的二维图像，经过专门的计算机软件处理，可以获得样品的三维。
如何鉴别共聚焦显微镜拍出的荧光是绿色荧光蛋白GFP发出的荧光 用报告基因技术呀 比如说最常用的绿色荧光蛋白GFP或者改造过的EGFP等。和目的基因构建成为融合蛋白，转入细胞中以后，用激光扫描共聚焦显微镜就可以观察到基因的亚细胞定位
荧光显微镜和激光共聚焦显微镜的区别 两者在工作原理及应用方面存在不同。分述如下：一、荧光显微镜1、荧光显微镜是以紫外线为光源，用以照射被检物体，使之发出荧光，然后在显微镜下观察物体的形状及其所在位置。荧光显微镜用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定位等。细胞中有些物质，如叶绿素等，受紫外线照射后可发荧光；另有一些物质本身虽不能发荧光，但如果用荧光染料或荧光抗体染色后，经紫外线照射亦可发荧光，荧光显微镜就是对这类物质进行定性和定量研究的工具之一。2、荧光显微镜原理：(A)光源：光源辐射出各种波长的光(以紫外至红外)。(B)激励滤光源：透过能使标本产生萤光的特定波长的光，同时阻挡对激发萤光无用的光。(C)荧光标本：一般用荧光色素染色。(D)阻挡滤光镜：阻挡掉没有被标本吸收的激发光有选择地透射荧光，在荧光中也有部分波长被选择透过。以紫外线为光源，使被照射的物体发出荧光的显微镜。电子显微镜是在1931年在德国柏林由克诺尔和哈罗斯卡首先装配完成的。这种显微镜用高速电子束代替光束。由于电子流的波长比光波短得多，所以电子显微镜的放大倍数可达80万倍，分辨的最小极限达0.2纳米。1963年开始使用的扫描电子显微镜更可使人看到物体表面的微小。
共聚焦和传统显微镜有什么区别？共聚焦有什么劣势呢？ 3 苏州微清医疗官网www.microcleartech.com ？ 9 ？ ？ 2 条评论 已认证的官方帐号 8 人赞同了该回答 生命科学成像的目标（器官、组织、细胞甚至亚细胞结构和蛋白等。
共聚焦显微镜可以先显示转染进去的绿色荧光，再显示荧光二抗么 （1）利用有色荧2113光蛋白标记技术进行蛋白定5261位研究此法也4102可称为活细胞定位.把两种具有相互作用1653的蛋白分别克隆到带有两种不同颜色荧光蛋白（绿色荧光蛋白或红色荧光蛋白）的载体中，共转染到功能细胞中（一般选用 COS7 细胞）表达带有荧光的融合蛋白.这样，相互作用的两种蛋白就被标上不同的荧光，可以在细胞内用荧光显微镜直接观测.在进行精确细胞定位或共定位时，必须用共聚焦荧光显微镜观测.因为共聚焦荧光显微镜（相当于给病人诊断的 CT）观测的是细胞内一个切面上的颜色.如果在一个切面上在同一区域看到两种颜色，就提示这两种蛋白在该区域内有相互作用.普通荧光显微镜看到的是一个立体图象，无法确定蛋白质共定位现象.在进行定位或共定位同时，也可以对细胞核进行染色.这样，在细胞中就有三种颜色.细胞核的显色帮助你确定共定位发生的位置.上面介绍的活细胞定位，其优点是表达的荧光蛋白荧光强，没有背景，观测方便.但缺点是相互作用的蛋白由于标上荧光蛋白，实际上是两个融合蛋白.融合蛋白的定位结果或共定位结果是否与天然蛋白分布一致，有待于进一步确定.而利用免疫荧光标记技术可以避免这一缺点.（2）利用双色或多色染色的免疫荧光技术进行蛋白定位研究。
用激光共聚焦显微镜得到的荧光随时间的变化，但是数据怎么导出来 没图片？你既然说像坐标上画的曲线一样，那么曲线对应的纵轴就该是荧光强度吧，这个轴上的数值变化就代表了荧光强度的变化。这个荧光强度的变化就代表了钙离子浓度的变化。我觉得你直接用荧光强度值的变化代替钙离子浓度变化就可以了。你的研究意义该是钙离子浓度的变化吧？当然，如果你非要将荧光强度值换算成钙离子浓度，你需要做下列工作。1 取一个标准钙离子浓度，染色后用共聚焦显微镜测荧光强度，2 标准样和你的样品需要同样的成像环境，主要是曝光时间，和相同的激光波长及能量3 标准样和你的样品要用同样浓度的荧光染料这是，你才能根据标准样和荧光强度的关系，推算样品中钙离子浓度。
