激光共聚焦显微镜的工作原理是什么？如何准备流式细胞的实验样品 采用点光源照射标本，在焦平面上形成一个轮廓分明的小的光点，该点被照射后发出的荧光被物镜收集，并沿原照射光路回送到由双向色镜构成的分光器。分光器将荧光直接送到探测器。光源和探测器前方都各有一个针孔，分别称为照明针孔和探测针孔。两者的几何尺寸一致，约100-200nm；相对于焦平面上的光点，两者是共轭的，即光点通过一系列的透镜，最终可同时聚焦于照明针孔和探测针孔。这样，来自焦平面的光，可以会聚在探测孔范围之内，而来自焦平面上方或下方的散射光都被挡在探测孔之外而不能成像。以激光逐点扫描样品，探测针孔后的光电倍增管也逐点获得对应光点的共聚焦图像，转为数字信号传输至计算机，最终在屏幕上聚合成清晰的整个焦平面的共聚焦图像。
激光扫描共聚焦显微镜技术的主要应用范围 激光扫描共聚焦2113显微镜（Confocal laser scanning microscope，CLSM)是近代最先进的细胞5261生物医学分析仪4102器之一。目前，激光扫描1653共聚焦显微技术已用于细胞形态定位、立体结构重组、动态变化过程等研究，并提供定量荧光测定、定量图像分析等实用研究手段，结合其他相关生物技术，在形态学、生理学、免疫学、遗传学等分子细胞生物学领域得到广泛应用。1.组织和细胞中的定量荧光测定激光扫描共聚焦显微镜可以从固定和荧光染色的标本以单波长、双波长或多波长模式，对单标记或多标记的细胞及组织标本的共聚焦荧光进行数据采集和定量分析，同时还可以利用沿纵轴上移动标本进行多个光学切片的叠加，形成组织或细胞中荧光标记结构的总体图像，以显示荧光在形态结构上的精确定位。常用于原位分子杂交、肿瘤细胞凋亡观察、单个活细胞水平的 DNA 损伤及修复等定量分析。2.细胞间通讯的研究动物和植物细胞中缝隙连接介导的胞间通信在细胞增殖和分化中起着重要作用。激光扫描共聚焦显微镜可通过观察细胞缝隙连接分子的转移来测量传递细胞调控信息的一些离子、小分子物质。该技术可以用于研究胚胎发生、生殖发育、神经生物学、肿瘤发生等过程中缝隙连接通讯的基本。
激光扫描共聚焦显微镜是如何成像的呢？ 组织样品中如果有可被激发的荧光物质，受到激发后发出的荧光经原来入射光路直接反向回到分光镜，通过探测针孔时先聚焦，聚焦后的光被光电倍增管（PMT）探测收集，并将信号。
荧光显微镜和激光共聚焦显微镜的区别 一、原理不同1、荧光显微镜：是以紫外线为光源，用以照射被检物体，使之发出荧光，然后在显微镜下观察物体的形状及其所在位置。2、激光共聚焦显微镜：在荧光显微镜成象的基础上加装激光扫描装置，使用紫外光或可见光激发荧光探针。二、特点不同1、荧光显微镜：用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定位等。细胞中有些物质，如叶绿素等，受紫外线照射后可发荧光；另有一些物质本身虽不能发荧光，但如果用荧光染料或荧光抗体染色后，经紫外线照射亦可发荧光。2、激光共聚焦显微镜：利用计算机进行图象处理，从而得到细胞或组织内部微细结构的荧光图象，以及在亚细胞水平上观察诸如Ca2+、pH值、膜电位等生理信号及细胞形态的变化。三、用处不同1、荧光显微镜：荧光显微镜是免疫荧光细胞化学的基本工具。它是由光源、滤板系统和光学系统等主要部件组成。是利用一定波长的光激发标本发射荧光，通过物镜和目镜系统放大以观察标本的荧光图像。2、激光共聚焦显微镜：激光扫描共聚焦显微技术已用于细胞形态定位、立体结构重组、动态变化过e799bee5baa6e997aee7ad94e4b893e5b19e31333431363665程等研究，并提供定量荧光测定、定量图像分析等实用研究手段，结合。
激光共聚焦显微镜的三维重建功能是如何实现的 可以.我们经常用它来看植物根内的GFP.神经生物学上可以用它来做电生理实验，当然也是活体啦.CLSM由共聚焦显微镜和飞秒红外激光器Verdi/Mira两部分组成，.
求助：激光共聚焦显微镜如何重建3D结构
荧光显微镜和激光共聚焦显微镜的区别 共1 荧光显微镜(Fluorescence microscope)：荧光显微镜是以紫外线为光源，用以照射被检物体，使之发出荧光，然后在显微镜下观察物体的形状及其所在位置。。
求助：激光共聚焦显微镜如何重建3D结构 与普通荧光显微镜相比激光共聚焦优势有：1、多重染色1)多重染色时，各染料之来间的cross-talk较少。2)可使用Cy5染料 Cy5的激发波长是645nm，荧光emission波长是670-680nm，人眼的可见光 波长是390-750nm.2、源Z轴上的分解能高。1)可了解组织的3D结构。2)可观查被染百上荧光的物质在细胞里的分布：例如，是在细胞膜上还是在细胞核里。3)即使组织标本较厚，度也可获得鲜明的画像。3、高画质1)通过调节问pin-hole，不但可提高Z轴上的分解能，也可提高X-Y轴上的分解能。2)可以在光学和电子两个水平调答节对比度，因此可以从低对比度组织标本，拍摄到高对比度的图像。
共聚焦显微镜原理和操作具体是什么？ 只要载物台沿着Z轴上下移动，将样品新的一个层面移动到共焦平面上，样品的新层面又成像在显示器上，随着Z轴的不断移动，就可得到样品不同层面的连续光切图像
