如何用紫外分光光度计测DNA浓度？ 紫外分光光度计的浓度极限

求 怎样用紫外分光光度法测蛋白质含量 1、280nm的光吸收法用标准曲线法进行测定。标准蛋白质溶液配制的浓度为1.0 mg/mL。常用的标准蛋白质为牛血清清蛋白(BSA)。2、280 nm和260 nm的吸收差法核酸对紫外光有很强的吸收，在280 nm处的吸收比蛋白质强10倍(每克)，但核酸在260 nm处的吸收更强，其吸收高峰在260 nm附近。核酸260 nm处的消光系数是280 nm处的2倍；而蛋白质则相反，其280 nm的紫外吸收值大于260 nm的吸收值。3、215 nm与225 nm的吸收差法蛋白质的稀溶液由于含量低而不能使用280 nm的光吸收测定时，可用215nm与225 nm吸收值之差，通过标准曲线法来测定蛋白质稀溶液的浓度。4、肽键测定法蛋白质溶液在238 nm处的光吸收的强弱，与肽键的多少成正比。因此可以用标准蛋白质溶液配制一系列50～500 mg/mL已知浓度的5.0 mL蛋白质溶液，测定238 nm的光吸收值A238，以A238为纵坐标，蛋白质含量为横坐标，绘制出标准曲线。未知样品的浓度即可由标准曲线求得。扩展资料：紫外分光光度法原理光谱法（spectrometry）是基于物质与电磁辐射作用时，测量由物质内部发生量子化的能级之间的跃迁而产生的发射、吸收或散射辐射的波长和强度进行分析的方法。光谱法可分为发射光谱法、吸收光谱法、散射光谱法；或。关于紫外分光光度计在测定时吸光度一直不稳定的情况？ 仪器预热没，浓度太高，吸光度超过1就会不稳定，氘灯是不是老化，电压是不是稳定 普通的分光光度计的工作波长一般在400～750nm之间，紫外分光光度计的工作波长在200～1000。紫外可见分光光度计的具体使用方法 使用前仪器要调零、调百校准，参比溶液又称空白溶液.测量时用作比较的、不含被测物质但其基体尽可能与试样溶液相似的溶液.通常，用参比溶液扫描的曲线应是一条平坦的直线.有时，基体中虽不含被测物质，但含有别的物质，这.紫外可见分光光度计怎么由吸光度计算含量？ 根据朗伯比尔定律得出：当一束平行单色光通过一定液层厚度的有色溶液时，由于溶质吸收了光能，光的强度就会减弱。溶液浓度越大，液层越厚，入射光越强，光被吸e5a48de588b6e799bee5baa631333431336161收的就越多。如果用公式表示的话，就可以表示为表示为：A=E*C*L（A为吸光度，C为溶液浓度，L为液层厚度）。E是物质在一定波长下的特征常数，与对光吸收的灵敏度呈正相关。该公式适用于有色溶液和均匀非散射的吸光物质（如：固、液、气）。在进行含量测定的时候，我们往往选择被测物质的最大吸收波长来作为使用波长，以防止外界干扰。于是，我们可以根据公式可以计算测定管中物质的含量，过程如下：A1=E1*C1*L1 A2=E2*C2*L2A1/(E1*C1)=A2/(E2*C2)由于标准液和待测液中的物质相同，故E1=E2∴C2=(A2/A1)*C1因为标准液和待测液的体积相等，物质含量m=C*V*M（M为相对分子质量，V为体积）故m2=（A2/A1)*m1所以溶液中物质的含量m2。扩展资料：在分光光度分析中，比尔定律是一个有限的定律，其成立条件是待测物为均一的稀溶液、气体等，无溶质、溶剂及悬浊物引起的散射；入射光为单色平行光。导致偏离朗伯-比尔定律的原因很多，但基本上可分为物理和化学两个方面。物理。紫外分光光度计的标准曲线的浓度怎么算？ 绘制标准曲线，需要标准浓度，标样加入溶剂里，而溶剂一般就是水，标样加入零，那就是对应水本身的吸光度

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