紫外分光光度法检测dna纯度

怎样用紫外分光光度计测DNA质量和浓度？ 一般用微量分光光度计比较快速简便，DNA浓度会直接在软件上显示，A260/A280的比值用于评估样品的纯度，纯净的样品比值大于1.8，低于2.0。较纯净的核酸A260/A230的比值大于2.0。 紫外分光光度计法测DNA纯度纯度偏小的原因? 1.DNA发生了损失,比如降解（虽然很少） 2.溶解DNA的溶液影响,水溶液的吸光低于tris中的吸光 用紫外线分光光度仪测DNA纯度得出来的比值是什么原理得出来的。是假设DNA和蛋白质只在自己吸收最高 核酸的最大吸收波长为260nm,蛋白质为280nm,在波长260nm时,1OD值相当于双链DNA浓度为50μg/ml,单链寡核苷酸的含量为30μg/ml,可以据此来计算核酸样品的浓度,还可通过测定在260nm和280nm的OD值的比值（OD260/OD280）,估计核酸的纯度.纯净DNA的比值为1.8,RNA为2.0.若比值高于1.8说明DNA样品中的RNA尚未除尽,若样品中含有酚和蛋白质将导致比值降低.270nm存在高吸收表明有酚的干扰.紫外分光光度法只能用于测定浓度大于0.25μg/ml的核酸溶液,对浓度更小的样品,可采用荧光分光光度法. 如何用紫外吸收法测定DNA含量？ 紫外吸收法测定DNA含量，组成核酸分子的碱基，均具有一定的吸收紫外线特性，最大吸收值在波长为250~270nm之间。核酸的最大吸收波长是260nm，这个物理特性为测定核酸溶液浓度提供了基础。在波长260nm紫外线下，1OD值的光密度相当于双链DNA浓度为50μg/ml;单链DNA或RNA为20μg/ml。可以次来计算核酸样品的浓度。分光光度法不但能确定核酸的浓度，还可通过测定在260nm和280nm的紫外线吸收值的比值(A260/A280)估计核酸的纯度。DNA的比值为1.8，RNA的比值为2.0。若DNA比值高于1.8，说明制剂中RNA尚未除尽。RNA、DNA溶液中含有酚和蛋白质将导致比值降低。270nm存在高吸收表明有酚的干扰。当然也会出现既含蛋白质又含RNA的DNA溶液比值为1.8的情况，所以有必要结合凝胶电泳等方法鉴定有无RNA。或用测定蛋白质的方法检测是否存在蛋白质。紫外分光光度法只用于测定浓度大于0.25μg/ml的核酸溶液。对于很稀的溶液可采用荧光光度法。生物帮上面有相关的方法步骤的，大脑模型 http://product.bio1000.com/100057/ 如何用紫外分光光度计测DNA浓度？ 实验原理 DNA/RNA在260nm处有最大的吸收峰，蛋白质在280nm处有最大的吸收峰，盐和小分子则集中在230nm处。因此，可以用260nm波长进行分光测定DNA浓度，OD值为1相当于大约50μg/ml双链DNA。如用25px光径，用H2O稀释DNA/RNA样品n倍并以H2O为空白对照，根据此时读出的OD260值即可计算出样品稀释前的浓度： DNA（ug/ml）=50×OD260读数×稀释倍数。RNA（ug/ml）=40×OD260读数×稀释倍数。DNA/RNA纯品的OD260/OD280为1.8或2.0，故根据OD260/OD280的值可以估计DNA的纯度。若比值较高说明含有RNA，比值较低说明有残余蛋白质存在。OD230/OD260的比值应在0.4-0.5之间，若比值较高说明有残余的盐存在.本实验室机器显示是OD260\\OD230，则比值应在2-2.5之间，偏小则说明有残余盐剩余。实验步骤 1.将制备的DNA悬浮溶解于TE缓冲液中[pH8.O,1Ommo1/L的Tris缓冲液,内含〈1mmol/LEDTA〉]或悬浮溶解在灭菌水中(依据DNA含量加水)。2.用可扫描的紫外分光光度计测定制备的DNA/RNA的紫外吸收曲线，测定OD260和OD280，并计算比值：OD260/OD280，纯DNA的此比值约为1.8～2.0。纯RNA的此比值约为大于2.0。3.根据：每毫升1微克的纯DNA的OD260值=0.020，计算所得DNA的纯度；每毫升1微克的纯RNA的OD260值=0... 如何用紫外分光光度计测DNA浓度 如何用紫外分光光度计测DNA浓度 首先，分光光度计测量的样品必须是均一的，摇匀后再测量结果会准确些。它是利用分光光度法对物质进行定量定性分析的仪器。... 紫外分光光度计法测DNA纯度纯度偏小的原因? 1.DNA发生了损失,比如降解（虽然很少）2.溶解DNA的溶液影响,水溶液的吸光低于tris中的吸光 电泳法和紫外分光光度法检测DNA的浓度和纯度,哪种方法更好 两种方法各有优劣. 电泳法更直观,如果你有DNA Maker,并且知道Maker的浓度,就可以使用一维条带分析软件如Quantity One分析样品中DNA的含量,而且可以很直观地了解目的DNA的纯度、大小等特性. 但是,由于电泳中染色特异性很强,对DNA、RNA之外的小分子污染情况无法检测. 紫外法可对样品中所有具紫外吸收特性的物质给出一个综合的结果.因此如果样品中有其他影响DNA后续操作的物质,样品吸光值就会有很大偏移. 值得注意的是,紫外法仅可作为一个参考,吸光值是结果,而不是原因.吸光值符合要求并不能代表DNA纯度符合要求.一般紫外分析后还是要跑个电泳,两者结合就可靠多了. 用紫外线分光光度仪测DNA纯度得出来的比值是什么原理得出来的。是假设DNA和蛋白质只在自己吸收最高？ 核酸的最大吸收波长为260nm,蛋白质为280nm,在波长260nm时,1OD值相当于双链DNA浓度为50μg/ml,单链寡核苷酸的含量为30μg/ml,可以据此来计算核酸样品的浓度,还可通过测定在260nm和280nm的OD值的比值（OD260/OD280）,估计核酸的纯度.纯净DNA的比值为1.8,RNA为2.0.若比值高于1.8说明DNA样品中的RNA尚未除尽,若样品中含有酚和蛋白质将导致比值降低.270nm存在高吸收表明有酚的干扰.紫外分光光度法只能用于测定浓度大于0.25μg/ml的核酸溶液,对浓度更小的样品,可采用荧光分光光度法. DNA或RNA样品不纯,用紫外分光光度计测定其浓度和纯度的准确性会受到影响,为什么? 分光光度计分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸，蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸，单链、双链DNA，以及RNA。核酸在波长 260 nm处有最高吸收峰。吸收紫外光的性质是嘌呤环和嘧啶环的共轭双键系统所具有的，所以嘌呤和嘧啶以及一切含有它们的物质，不论是核苷、核苷酸或核酸都有吸收紫外光的特性。但紫外法不能区分DNA和RNA，只能用来鉴定核酸的纯度和含量。蛋白质由于含有芳香氨基酸，因此也能吸收紫外光。通常蛋白质的吸收高峰在280nm波长处，在260nm处的吸收值公为核酸的十分之一或更低，故核酸样品中蛋白质含量较低时对核酸的紫外测定影响不大。RNA的260nm与280nm吸收的比值在2.0以上；DNA的260nm与280nm吸收的比值则在1.9左右。当样品中蛋白质含量较高时比值即下降。分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光源透过测试的样品后，部分光源被吸收，计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。核酸的定量 DNA和RNA都有吸收紫外光的性质，它们的吸收高峰在260nm波长处，每种核酸...

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