实时定量数据处理时对照组的基因相对表达量怎么计算？ 如何通过荧光定量目的基因和GAPDH计算相对表达量内参就是一个表达量在各个组基本保持不变的基因，又叫看家基因，比如常用的GAPDH，actin。或者18s rRNA也可以。如果内参表达量一致，说明你PCR的上样量一致，样本的质量也一致。如果出入很大，说明你的样本的浓度或者是质量有问题。测到的目的基因的表达量就不可靠了管家基因是用来定量的。用来计算相对表达量。管家基因在相同量样品中的表达量我们认为是一致的。然后根据这个量来计算你的基因在不同样品中的表达量。所以每一个都需要单独的样品。基因组干扰需要你在提取RNA以后用DNase处理样品。如果不放心，可以拿处理过的RNA做膜版，跑一次，如果有带就是有污染，如果没有可以合成cDNA库了。
请问我在做荧光定量pcr的时候内参的ct值很低大约在35左右，而目的基因ct值在25左右 有哪位高手能指点一下
western blot内参和marker的区别 看到你的目的蛋白条带在30和35kD之间，就可以初步断定是你的目的蛋白。2.内参呢，内参也叫看家基因，在组织或细胞中都会表达，且表达量在不同组织或细胞中几乎是相同的，。
做RT-PCR内参的作用是什么？应该如何选择管家基因 你说的应该是real time PCR吧，注意RT其实是逆转录reverse transcription的缩写，和real time一定要分开来.常说的qPCR，qRT-PCR，都是通过实时（real time）的方法，测定样品中某个模版的起始量ct值但是呢，由于之前RNA提取、反转等步骤，各个步骤存在不同的效率，ct值并无法真实反应样品中模版的绝对量，因此，需要一个内参来做为参考.比方说，A基因的ct值，在a样品中是18，在b样品中是20，由于a b样品存在RNA质量等等一系列不同，你无法直接就判断这个基因在a样品中的表达量是b样品的4倍.这时候，我们需要一个内参，假如内参ct值在a样品中是14，而在b样品中是15.由于内参的稳定性，在不同样品中被认为是表达量一致的，因此，A基因的在ab样品之间的-ΔΔct值是1，也就是表达量为2倍的关系.这里，我们可以知道内参的作用，即通过测量内参，可以在后面分析过程中将不同样品的起始量均一化.内参需要选择在不同样品中有稳定表达量的基因，这就是为什么内参经常选择看家基因的原因.以小鼠为例，常用的内参有actin gapdh hprt等等.
看家基因GApDHmRNA引物是什么东西？有什么用？成分？ 引物，作为DNA复制的起始点，在核酸合成反应时，作为每个多核苷酸链进行延伸的出发点而起作用的多核苷酸链。GAPDH的一个引物与感兴趣区域一端的一条DNA模板链互补，另一个引物与感兴趣区域另一端的另一条DNA模板链互补。可以有很多种，用软件可以设计一段基因的引物，再用PCR来扩增这段基因。GAPDH是甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase）的英文缩写。该酶是糖酵解反应中的一个酶。该基因是看家基因，几乎在所有组织中都高水平表达，在同种细胞或者组织中的蛋白质表达量一般是恒定的，且不受含有的部分识别位点、佛波脂等的诱导物质的影响而保持恒定，故被广泛用作realtime pcr，Western blot等实验操作的标准化的内参。
荧光定量PCR的内参和目的基因一定要放一起吗 荧光定量PCR的内参和目的基因一定要放一起内参就是一个表达量在各个组基本保持不变的基因，又叫看家基因，比如常用的GAPDH，actin。或者18s rRNA也可以。如果内参表达量。
