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悬浮细胞做MTT时接种密度多少为宜呢 悬浮细胞24孔板接种密度

2021-03-16知识7

六孔板细胞铺满时细胞数大约是多少(六孔板,细 看浓度有多少,一般30-300个进行计数。HepG2细胞分泌多种血浆蛋白:清蛋白、α2-巨球蛋白、血纤维蛋白溶酶原、铁传递蛋白等。注释:该细胞表达3-羟基-3-甲基戊二酸辅酶A还原酶和肝甘油三酸脂脂肪酶。

悬浮细胞做MTT时接种密度多少为宜呢 如果细胞生长良好25000-30000就可以,你的接种密度不算太高 我养的悬浮细胞在密度为40000的时候,测出的OD值太高

悬浮细胞的转染怎么做 悬浮32313133353236313431303231363533e58685e5aeb931333365653932细胞的转染方法:(以下内容转自生物帮资讯)DXY721认为:悬浮细胞和贴壁细胞在转染过程中差别不大,主要差别在于转染后的筛选,当然如果你做的是瞬时转染就不存在筛选的问题了。其实转染的过程很简单,问题是能不能转的进去的,转染率能有多少,转进去是否可以稳定表达目的蛋白等等。我们也是用脂质体做悬浮细胞的转染,说明书上都有具体的操作过程,将脂质体和目的基因按比例混合,然后加到细胞悬液里就OK了,说的简单,实际上还是有一些细节要注意的,比如脂质体和目的基因混合的比例,转染的细胞数,细胞的代数,细胞的状态,有的还要求在转染的前一天传代一次,不过不要怕,这些在脂质体说明书上都有明确的说明,按照说明书做就可以了。jinghuanlv认为:悬浮细胞和贴壁细胞转染还是有很大不同的。脂质体转染的原理基于电荷吸引原理,先形成脂质体-DNA复合物,散布在细胞周围,然后通过细胞的内吞作用,将目的基因导入细胞内,而脂质体复合物与贴壁细胞的接触机会比悬浮细胞高出很多倍,所以,脂质体转染时悬浮细胞的转染效率要明显低于贴壁细胞。我们实验室转染悬浮细胞是用的电穿孔法,目前。

如何把六孔板细胞铺的均匀 6孔板,采用2113将第一个孔加入少量5261无血清培养4102基,晃动浸润整个1653孔底,然后用移液枪专吸至第二孔属,同样方法浸润孔底,其它孔一次类推,这样整个孔底都是湿润的,细胞悬液会平铺在整个孔底,加细胞悬液的时候可以避免加在中间中间细胞多,而加在周边晃匀后周边细胞多中间少的现象,细胞分散较均匀,注意加完细胞悬液后要放工作台静置一下。这个方法就是有点慢,但操作熟练了也不慢。也可以采用轻拍的方式,但力度没有96孔板好掌握,效果没有96孔板好,所以我放弃改用浸润孔底的方法。2、细胞悬液加完后,将细胞培养板抬高,对着灯光,从底部往上看,看细胞有没有抱团。然后从底部敲击,使之分散。3、如果实验室有平板振荡器的话,我建议用这个仪器稍振荡一下,效果不错,就是振幅小,频率高的那种。4、细胞要尽量打散,大部分呈单个状态。离心后,要充分悬浮!还有转移到六孔板后,是要晃得!晃的时候最好不要让那个细胞液转圈,不然细胞就全被带到中间去了,就会不均匀!

悬浮细胞病毒转染铺6孔板要多少细胞1、慢病毒转染前18-24小时,将贴壁细胞以1×10^5/孔铺到24孔板中。使细胞在慢病毒转染时的数量为2×10^5/孔左右。2、第二天,用含有6 μg/ml polybrene的2ml新鲜培养基替换原培养基,加入适量病毒悬液。37℃孵育。3、(对polybrene毒性敏感的细胞选作此步骤)4小时后加入2ml新鲜培养基以稀释polybrene。4、继续培养24小时,用新鲜培养基替换含有病毒的培养基。5、继续培养。如果慢病毒含有荧光蛋白,一般转染48小时后可见明显荧光表达,72小时后更加明显。如需FACS检测转染效率,可在转染后72-96小时进行。如果慢病毒含有抗性基因并且需要加药筛选,可以在转染3-4天后开始加药。

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96孔板一般接种多少间充质干细胞 总结下各种孔板细胞接种量2113 仅供参考细胞培养瓶(板)52614102生长面积容量1653与细胞数(大约)96孔板 4~5X10 4 35mm培养皿 1X10 648 孔板 1.3X10 5 60mm培养皿 2.6X10 624孔板 2.5X10 5 100mm培养皿 7X10 612孔板 5X10 5 150mm培养皿 1.8X10 76孔板 1.2X10 6细胞瓶面积 容量 工作体积 细胞数目612.5cm2 25ml 2ml 5X10 525cm2 50ml 5ml 1X10 6835cm2 75ml 10ml 2X10 675 cm2 250ml 15ml X10 6150cm2 700ml 40ml 1.1X10 7补充:不同孔板所加培养液的液面都不宜太深,一般在2~3mm范围,结合不同孔的底面积就可算出各培养孔的适宜加液量(参考下表)。若加液量过多会影响气体(氧气)交换,而且在搬动过程中易溢出造成污染。具体所加细胞密度依实验的目的不同灵活掌握。

细胞在接种在24孔板上时,孔的周围细胞密集,中间细胞稀少,怎样操作才能使细胞分布均匀? 博凌2113科为解答:周围细胞密集,中间细胞5261稀少这种情况一般是4102种板时培养液过少,液面总是呈一1653凹面,如果液面过低,孔中间就基本上没什么细胞,所以种板时一定不能吝啬培养液,待贴壁后可以用比较 少量的培养液处理周围细胞稀少,中间细胞密集:这种情况一般是种板后过于晃动,特别是旋转着晃动.有人才用十字方向的晃动方法使细胞分散均匀.但我个人认为,将细胞加入孔后,用枪或移液器充分吹打混匀后就不用,也不能再晃动,甚至拿着孔板走路带来的震动都会 让细胞往中间集中.当然,无论是哪种情况,首先都需要保证细胞在种板时时均匀分布的,即种板时的细胞悬液一定要混匀细胞分布均匀与否有一点很关键,即每种细胞是有个体差异的,别人的细胞操作不一定适合于你.所以要靠自己摸索,且找出专属于自己细胞的一套规律,就 我个人而言,有如下经验:1.所有待接种的细胞悬液在种板前一定要用吸管混匀。2.按资料记载,24孔板的液体量为1ml,个人也觉得1ml的量足矣。3.接种时,要慢慢加样,且记得轻微旋转枪头,这样做对细胞均匀分布有一定效果。4.接种后最好直接放入培养箱让细胞适应培养板这个新的环境,个人认为没有必要在室温放置一段时间。5.根据细胞的。

请教培养悬浮细胞如何进行免疫细胞化学染色 将已经消毒的盖玻片置于6孔培养板中,按104-105/ml的细胞密度将细胞接种于培养板中进行细胞爬片,培养6-12小时,待细胞贴壁后,3-5。

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